信帆生物帶你了解磁珠法DNA 提取試劑盒

動(dòng)物組織基因組 DNA 提取試劑盒（磁珠法）說(shuō)明書(shū)

規(guī)格：50T

保存：磁珠可以在室溫下（ 15-25℃）運(yùn)輸，但請(qǐng)?jiān)?4℃冰箱中保存，禁止凍存。蛋白酶 K 需-20℃保存，以保證其活性。其余試劑可以室溫保存，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于 2-8℃。復(fù)檢期 1 年。

產(chǎn)品說(shuō)明：

本試劑盒采用具有*分離作用的磁珠和緩沖液系統(tǒng)，可從樣品中分離純化高質(zhì)量基因組DNA。特殊包被的磁珠在一定條件下對(duì)目的 DNA 具有很強(qiáng)的親和力，而當(dāng)條件改變時(shí)，磁珠釋放吸附的 DNA，能夠達(dá)到快速分離純化 DNA 的目的。整個(gè)過(guò)程安全、便捷，提取的 DNA 純度高。使用本試劑盒純化的基因組 DNA 的 OD260/OD280 均在 1.7-1.9 之間，可以應(yīng)用于各類(lèi)下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。使用前請(qǐng)先在漂洗液中配置 70%乙醇。若裂解液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在 37℃水浴中預(yù)熱 10min 溶解沉淀，搖勻后使用。

操作步驟：

1. 裂解

取適量的動(dòng)物組織樣本（脾臟≤20 mg；肺臟≤20 mg；腎臟≤20 mg；）用液氮研磨成粉末，并迅速轉(zhuǎn)移到已加入480μl 裂解液S1、150μl裂解液S2以及20μL蛋白酶K（20 mg/mL）的EP管中，吹打或震蕩混合均勻。將EP管置于65℃水浴25～30min。待冷卻到室溫，12000rpm 4℃離心5-10min。

2. 結(jié)合

盡量取凈上清于新的1.5 mL EP管中，加入等體積的異丙醇以及振蕩混勻的50μL磁珠，顛倒混勻1 min，靜置3 min。將EP管置于磁鐵上進(jìn)行磁分離，吸棄廢液（吸凈管蓋及管底殘液）。

3. 洗滌

加入600 μL 漂洗液（使用前請(qǐng)預(yù)先配置70%乙醇），輕柔混勻1-2 min，將EP管置于磁力架上進(jìn)行磁分離，吸凈管蓋及管底的殘液；重復(fù)本步驟一次。

4. 洗脫

室溫晾干5～10 min至乙醇揮發(fā)*，加入50～100 μL洗脫液，緩慢抽吸混勻，65℃水浴10 min。（每隔1～2 min輕搖EP管幾下混勻）。將EP管置于磁力架上進(jìn)行磁分離，小心吸取上清液至新的EP管中，進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。（判斷磁珠晾干的標(biāo)準(zhǔn)：側(cè)面觀察磁珠無(wú)反光，正面觀察磁珠邊緣龜裂）

信帆生物帶你了解磁珠法DNA 提取試劑盒

注意事項(xiàng):

1. 動(dòng)物組織（脾、肺、腎）要用液氮充分研磨。

2. 整個(gè)裂解過(guò)程操作盡量溫和，并在要求時(shí)間內(nèi)完成。

3. 如果組織液濃度較高，則建議磁珠量可適當(dāng)增加，以獲取高濃度 DNA。

4. 客戶(hù)自備試劑：異丙醇、無(wú)水乙醇、蛋白酶 K。

5. 使用前請(qǐng)?jiān)谄匆浩恐蓄A(yù)先配制 70%乙醇。

6. 磁珠在使用前一定要充分混勻。
 

常見(jiàn)問(wèn)題及參考意見(jiàn)：

1. 得率低

（1）組織沒(méi)有*裂解完，裂解時(shí)間不夠或沒(méi)有離心直接進(jìn)行下一步操作：可適當(dāng)延長(zhǎng)裂解時(shí)間，zui長(zhǎng)不超過(guò)60 min。樣品裂解后，請(qǐng)一定要離心后再進(jìn)行下一步操作。

（2）結(jié)合不充分：結(jié)合過(guò)程中要使磁珠一直處于懸浮狀態(tài)，并且充分顛倒混勻。

（3）取樣量大于說(shuō)明書(shū)給出量：取樣量請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

2. 條帶彌散

（1）樣品不新鮮或反復(fù)凍融多次：盡量用新鮮樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果樣品需要保存，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)，分裝保存樣品，盡量避免反復(fù)凍融；

（2）環(huán)境溫度太高：可以將研缽置于-20℃預(yù)冷或置于液氮保存后再進(jìn)行研磨，如果所提取材料基因組DNA極易降解，可用液氮研磨；

（3）裂解時(shí)間太長(zhǎng)：裂解時(shí)間不要超過(guò)60 min；

（4）提取后模板DNA放置時(shí)間太長(zhǎng)：提取后如有需要，請(qǐng)盡量及時(shí)進(jìn)行凝膠電泳實(shí)驗(yàn)。短期內(nèi)可置于4℃保存，長(zhǎng)期請(qǐng)置于-20℃保存（盡量注意避免反復(fù)凍融）。

3. DNA液有顏色

（1）洗滌過(guò)程不充分：如果結(jié)合后磁珠呈團(tuán)狀、 絲狀或顆粒狀，可增加點(diǎn)陣力度及次數(shù)，充分吹打混勻。

（2）裂解不充分：適當(dāng)增加裂解液S1和S2用量，也可以延長(zhǎng)裂解時(shí)間。

（3）樣品用量大于說(shuō)明書(shū)給出量而其他試劑用量沒(méi)有相應(yīng)調(diào)整：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，如果需要增大樣本量，可以等比例增加裂解液S1、S2以及磁珠用量，其他試劑用量不變。

4. DNA樣品不純，干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)

（1）DNA液有乙醇?xì)埩簦合礈鞎r(shí)，請(qǐng)注意吸凈管蓋及管底的殘液。此外，磁珠應(yīng)*干燥，保證無(wú)乙醇?xì)埩簟?/span>

（2）磁珠洗滌不充分：加入70%乙醇溶液時(shí)，請(qǐng)吸打或點(diǎn)陣混勻。如有必要，可增加一次洗滌步驟。

（3）DNA液中吸入磁珠：如果不小心吸入磁珠，請(qǐng)將上清液返回原管，待磁珠*吸附至管壁后重新吸取上清。或者將吸取的上清液10000 rpm離心2 min，再取上清。

（4）DNA液中含有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)：建議適當(dāng)減少樣品用量。或可重復(fù)一次提取過(guò)程去除雜質(zhì)。

（5）DNA液中含有輕微鹽離子等雜質(zhì)，此為洗脫液（含有抑制核酸降解的成分）正常現(xiàn)象，不影響實(shí)驗(yàn)，可將獲得的DNA置于-20℃環(huán)境分裝保存。

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