羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒多種樣本，皆可操作

羥脯氨酸(hydroxyproline，HYP)是亞氨基酸之一，是一種非必需氨基酸，是膠原組織的主要成分之一，且為膠原中*的氨基酸，約占膠原氨基酸總量的13%。膠原蛋白是體內含量多的蛋白質，約占人體蛋白質總量1/3。利用羥脯氨酸在膠原蛋白中含量高這一特點，通過血液和尿液對羥脯氨酸的測定，可了解體內膠原蛋白分解代謝情況，即可作為結締組織分解情況指標。很多疾病可伴有膠原代謝變化而引起血、尿及組織羥脯氨酸的含量改變。目前臨床檢驗普遍使用氨基酸自動分析儀效果滿意，此外還有比色法、氣相色譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳法等。

產品說明：
HYP 是機體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此 HYP
含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。

樣品經水解產生游離的 HYP，進一步被氯胺 T 氧化，氧化產物與對二甲氨基苯甲全反應，產生
紅色化合物，在 560nm 處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液 560nm 吸光值，可計算 HYP 含量。

操作步驟：
一、羥脯氨酸提取：
1、組織：稱取約 0.2g 樣品于玻璃管，將組織盡量剪碎以便消化，蓋子稍松不密閉。加入 2mL 的提
取液，煮沸或 110℃烘箱 2 至 6 小時消化至沒有可見大的團塊，16000rpm，25℃，離心20min（若離心后仍有雜質，可通過過濾去除），用 10mol/L NaOH（約 1mL）調節 pH 值至 6～8 范圍內。蒸餾水定容至 4mL，取上清待測。（過程中可能有黑色物質生成，若長時間不能消化，可能為碳化的物質）
2. 細胞：取500萬個細胞，加入1mL的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小時消化至透明狀，16000rpm，25℃，離心 20min，用 10mol/L NaOH（約 0.5mL）調節 pH 值至 6～8 范圍內。蒸餾水定容至 2mL，取上清待測。

注意事項：
1、 OD 值大于 1.0，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數。
2、 試劑有一定的毒性，請操作時做好防護措施，防止吸入或與皮膚接觸。
3、 按樣本蛋白濃度計算時，需單獨提取樣本中的蛋白質并測定。