人抗鼠抗體(HAMA)定性檢測試劑盒真的太棒了！

使用目的
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗鼠抗體(HAMA)表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人抗鼠抗體(HAMA)表達(dá)。用純化的人抗鼠抗體
(HAMA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中抗鼠抗體(HAMA)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除
去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗鼠抗體(HAMA)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原- 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與
CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中人抗鼠抗體(HAMA)的存在與否。

標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

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操作步驟
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為抗鼠抗體(HAMA)陰性
陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為抗鼠抗體(HAMA)陽性

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