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辣根過(guò)氧化物酶 HRP主要用途是什么!

更新時(shí)間:2019-10-15      瀏覽次數(shù):3101

辣根過(guò)氧化物酶 HRP主要用途是什么!

 

說(shuō)明:POD是一種具有氧化還原酶性質(zhì)的血紅素蛋白。用于生化研究,是酶標(biāo)記法所用的一種主要酶。也用于生物液體中 葡萄糖和半乳糖的測(cè)定。

 

溶解性 10 mg/mL in water
來(lái)源 From horseradish
CAS 9003-99-0
儲(chǔ)存條件 -20℃
酶活/效價(jià) 233-300units/mg.solid
外觀(性狀) 褐色結(jié)晶性凍干粉狀 

 

HRP是一種分子量達(dá)44 000的糖蛋白,由無(wú)色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉結(jié)合而成,中性糖和氨基糖約占18%,主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一個(gè)HRP分子中含一個(gè)氯化血紅素IX作輔基,該輔基在403nm波長(zhǎng)處有大吸收峰,而去輔基的酶蛋白在275nm波長(zhǎng)處有大吸收。HRP在403nm的OD值與275nm的OD值之比,也就是所謂的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值僅說(shuō)明血紅素基團(tuán)在HRP中的含量,并非表示HRP制劑的真正純度,而且RZ值高的HRP制劑,并不意味著酶活性也高。

 

但可以一純酶溶液在10mm光徑403nm波長(zhǎng)下的吸光度來(lái)計(jì)算酶濃度[1%(W/V)酶溶液吸光度為22.5,濃度為227umol/L]。HRP干燥貯存于–20oC可保持穩(wěn)定,使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸鈉、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L細(xì)胞色素C(pH 7.4)溶液作為基質(zhì)冷凍保存,可使酶結(jié)合物穩(wěn)定數(shù)年。HRP對(duì)熱及有機(jī)溶劑的作用比較穩(wěn)定,用甲苯與石蠟切片處理或用純乙醇或l0%甲醛水溶液固定做冷凍切片,均不能使其活性改變。

 

qing化物或硫化物在10–5~10–6mol/L濃度時(shí)具有可逆性地抑制HRP的作用;氟化物、疊氮化合物或羥胺僅在高于10-3mol/L濃度時(shí)抑制HRP;HRP還可被羥甲基過(guò)氧化氫不可逆地抑制。強(qiáng)酸也是HRP的強(qiáng)烈的抑制劑。

 

HRP之所以是迄今為止在ELISA中應(yīng)用為廣泛的標(biāo)記用酶,主要是因?yàn)槠湟环矫嬉子谔崛。瑑r(jià)格相對(duì)低廉;另一方面性質(zhì)穩(wěn)定,耐熱及有機(jī)溶劑的作用,與抗原或抗體偶聯(lián)后,活性很少受損失。

 

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