T細(xì)胞亞群檢測試劑盒操作注意以下這幾點(diǎn)

標(biāo)本制備：

取肝素抗凝（25μl/ml）的靜脈血1～2ml，PBS稀釋1-2倍后，沿裝有等量淋巴細(xì)胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層，保持兩種液體界面清晰，離心（2000轉(zhuǎn)/分）15-20分鐘，吸取兩液面交界處的單個(gè)核細(xì)胞層，加5倍PBS，離心（1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，棄上清液，沉淀即為單個(gè)核細(xì)胞。利用試管中剩余的少許回流液體（約滴）混勻細(xì)胞，制成單個(gè)核細(xì)胞懸液。滴30μl細(xì)胞懸液于載玻片上，靜置2分鐘使細(xì)胞下沉粘附于玻片上，吸去液體，快速吹干或37℃溫箱1小時(shí)烤干。或用PBS將單個(gè)核細(xì)胞調(diào)至2×10⁵個(gè)/ml，離心涂片機(jī)1000轉(zhuǎn)離心1-2分鐘制片，快速吹干或37℃溫箱1小時(shí)烤干。涂片取防脫片劑5-10μl均勻推片，亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上，待干后制備細(xì)胞涂片，以防掉片。

顯色劑的配制：

分別取A液25ul，B液25ul置于干凈試管中混勻，室溫放置2-5分鐘，加1ml蒸餾水，混勻，再加C液100ul待用。

*使用，根據(jù)所需顯色劑用量，按照以上比例現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)本染色：

1. 充分干燥（室溫2小時(shí)以上或過夜）的細(xì)胞涂片先用記號筆在標(biāo)本外畫圈，然后滴加固定液50μl，室溫靜置2-3分鐘，用PBS淋洗，擦干玻片背面及細(xì)胞外的PBS。

儲存條件及有效期：

2-8℃保存，禁止冷凍，有效期為12個(gè)月。有效期內(nèi)可在0-25℃范圍內(nèi)七天短時(shí)運(yùn)輸。使用時(shí)應(yīng)及時(shí)及拿及用，使用后應(yīng)立即放回冰箱。生物試劑日期，使用期限或失效日期見標(biāo)簽。

注意事項(xiàng)：

1. 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測是種包含多步驟的檢測方法，試劑的選擇、樣本的處理、涂片的制備、染色及其結(jié)果的判讀均需要進(jìn)行業(yè)的培訓(xùn)。

2.任何陽性或陰性的解讀，應(yīng)由病理科醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學(xué)，臨床表現(xiàn)及其它檢測方法進(jìn)行，不作為單獨(dú)的診斷指標(biāo)。

3. 復(fù)染過度或不足都可能影響結(jié)果的判讀。

4. 陰性結(jié)果表示未檢出抗原，不定表示樣本中無該抗原存在，待測抗原編碼基因變異，抗原低表達(dá)或抗原修復(fù)不當(dāng)?shù)龋紩斐煽乖瓱o法檢出。

5. 本試劑僅對經(jīng)處理的人外周血細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證，不做其他用

6. 試劑盒使用中，應(yīng)有適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施，以避免試劑同皮膚和眼睛接觸。